Direct quantification of protein (UV method)

該方法直接在280nm波長下測試蛋白質(zhì)。選擇Warburg公式，光度計可以直接顯示樣品濃度，也可以選擇相應(yīng)的轉(zhuǎn)換方法將吸光度值轉(zhuǎn)換為樣品濃度。蛋白質(zhì)測定過程非常簡單。首先測試空白溶液，然后直接測試蛋白質(zhì)。由于緩沖區(qū)中存在一些雜質(zhì)，因此通常需要消除320nm的 “背景” 信息，并將此功能設(shè)置為 “on”。與核酸的測試類似，要求A280的吸光度值至少大于0.1a，最佳線性范圍在1.0-1.5之間。當(dāng)選擇Warburg公式來顯示實驗中的樣品濃度時，發(fā)現(xiàn)讀數(shù) “漂移”。這是正?，F(xiàn)象。事實上，只要A280吸光度值的變化范圍不超過1%，就說明結(jié)果非常穩(wěn)定。漂移的原因是將Warburg公式的吸光度值轉(zhuǎn)換為濃度并乘以某個系數(shù)。只要吸光度值稍有變化，濃度就會放大，使結(jié)果顯得非常不穩(wěn)定。直接蛋白質(zhì)定量方法適用于測試具有相對簡單組分的相對純的蛋白質(zhì)。與比色法相比，紫外直接定量法快速，操作簡單; 然而，它容易受到平行物質(zhì)，如DNA的干擾; 此外，它靈敏度低，需要更高的蛋白質(zhì)濃度。